Нанотехнологическое сообщество Нанометр, все о нанотехнологиях
на первую страницу Новости Публикации Библиотека Галерея Сообщество Объявления Олимпиада ABC О проекте
 
  регистрация
помощь
 
Схематическое изображение "классического" "сэндвич"-метода (слева) и модифицированного метода (справа), предложенного авторами статьи
Схематическое изображение ключевой реакции восстановления ионов золота пероксидом водорода
Наглядный пример того, как предложенный авторами метод реализуется на практике. В качестве маркеров используются простатический специфический антиген (а) и антиген ВИЧ p24 (b)

ELISA стала чувствительнее

Ключевые слова:  иммуноферментный анализ, плазмонные наночастицы золота

Опубликовал(а):  Шуваев Сергей Викторович

31 октября 2012

Иммуноферментный анализ (ИФА), широко применяемый в лабораторных исследованиях для качественного и количественного определения различных вирусов (и не только), может стать, еще доступнее. Основная идея данного анализа заключается в специфической реакции антиген-антитело, которую можно описать с помощью следующих схем:

аАг + bАт* → а(Аг*-Ат) + (b-а)Ат* (неконкурентный ИФА)

где Аг - анализируемый антиген, Ат* - антитело, добавленное в количествах, значительно превышающих, концентрацию Аг. В качестве аналитического сигнала может служить концентрация образующегося комплекса (Аг-Ат*), контролируемая с помощью ферментной метки, или же по концентрации оставшегося в растворе Ат*.

аАг* + bАт + сАг → d(Аг*-Ат) + е(Аг-Ат) + (а-d)Аг* + (с-е)Аг (конкурентный ИФА),

где Аг* - меченый антиген, добавленный в известном количестве к анализируемому образцу. В качестве аналитического сигнала в данном случае используется концентрация комплекса (Аг*-Ат), которая обратно пропорциональна концентрации Аг. Поскольку в данном случае меченный антиген Аг* конкурирует с немеченным Аг за возможность образовать комплекс с антителом, данная разновидность ИФА получила название конкурентной в отличие от предыдущей, неконкурентной.

Одной из разновидностей неконкурентной ИФА является так называемый "сэндвич"-метод. В этом случае на стадии выявления специфического иммунокомплекса антиген оказывается зажатым между молекулами иммобилизованных и меченных антител. В "классическом" варианте этого метода ферментативная реакция проходит в присутствии перекиси водорода и неокрашенного субстрата, который в процессе пероксидазной реакции окисляется до окрашенного продукта реакции на заключительном этапе проведения исследования. Однако недостатком данного метода является возможность обнаружения искомого соединения (вирус, макромолекула) невооруженным взгядом лишь в больших концентрациях. Однако исследователи из Имперского колледжа в Лодоне предложили модифицированный метод, который позволяет с первого взгляда определить концентрацию, например, вируса ВИЧ при низких концентрациях антигенов (вплоть до 1 × 10−18 г/мл).

Основная идея предложенного метода заключается в добавлении ионов золота Au3+, которые в отсутствие аналита быстро восстанавливаются присутствующим в системе пероксидом водорода с образованием сферических наночастиц золота с характерной полосой плазмонного резонанса в синей области. При добавлении в систему аналита и, следовательно, появления конкурирующий реакции с участием H2O2, скорость восстановления Au3+ уменьшается, что способствует образованию агрегированных наночастиц и смещению пика плазмонного резонанса в красную область спектра.


Источник: Nature Nanotechnology



Комментарии
10^-18!
Шуваев Сергей Викторович, 31 октября 2012 16:39 
Владимир Владимирович, Вы как редактор могли бы поправить "косяки", прежде чем выставлять их на всеобщую забаву! Это совсем не моя тема и не моя инициатива это здесь публиковать. А если ни у кого нет времени это читать и отслеживать, то нафиг этот портал нужен в принципе!?
P.S. А что со смещением пика плазмонного резонанса не так? У агрегатов, вроде, всегда гипсохромный сдвиг наблюдается.
Владимир Владимирович, 31 октября 2012 18:16 
Сергей Викторович,
Я редактор лишь по статусу доступа...(и "выставлял" не я) и про "нафиг" у меня нет хороших и правильных ответов...

P.S. А со смещением пика плазмонного резонанса, если умными терминами, то сдвиг батохромный (в область меньших энергий) - Вы попутались в комплиментарных цветах - агрегаты действительно становятся синими/фиолетовыми из красных, но это не есть "синий" сдвиг.
Шуваев Сергей Викторович, 31 октября 2012 18:23 
Ну поменяю местами пики до и после - делов-то. Просто непонятно, зачем все это обсуждение выставлять на всеообщее обозрение. Можно просто поправить и всё! Мы же не мою квалификацию в данной теме обсуждаем, а статью в Натуре. Или содержание никому не интересно? Можно вообще убрать графу "опубликовал", чтобы была коллективная ответственность.
Владимир Владимирович, 01 ноября 2012 05:21 
Поправить сложнее, чем критиковать отдельные места...
Я просто на комментарий Евгений Алексеевича заглянул с большими числами.
За излишнюю образность комментариев извините.

P.S. Удалил этoт комментарий; в следующий раз, пожалуй, удалю всего этого комментатора
Косяки и опечатки поправить несложно.

Тут интересен другой момент.
Молярная масса антигена должна хотя бы 10-15 кДа. Пусть в данном случае 25 кДа. (можно поискать точные данные, но немного лениво )

10-18г - это всего 602 кДа, то есть 24 молекулы антигена/мл. В этом случае очень возрастает случайностный фактор анализа. Например, искомый антиген не образовал комплекса с антителом. Соответственно, воспроизводимость и ценность результатов падают.
Не исключено, что это просто некий артефакт, а не ожидаемый результат научного поиска.
Шуваев Сергей Викторович, 01 ноября 2012 12:40 
Александр Ринатович, чтобы оценить влияние случайных факторов, наверное, нужны полноценные клинические испытания. Представленные в статье испытания обладают одним недостатком - малой выборкой (20 ВИЧ-позитивных и 10 ВИЧ-негативных пациентов).
P.S. Возможность получения положительного теста у ВИЧ-негативных пациентов и наоборот - неизбежная плата за высокую чувствительность метода, здесь навряд ли можно что-то исправить.

Для того чтобы оставить комментарий или оценить данную публикацию Вам необходимо войти на сайт под своим логином и паролем. Зарегистрироваться можно здесь

 

Механизм
Механизм

VIII Международная Конференция «Деформация и разрушение материалов и наноматериалов»
VIII Международная Конференция «Деформация и разрушение материалов и наноматериалов» (http://dfmn.imetran.ru/) пройдет в Москве (ИМЕТ РАН) с 19 по 22 ноября 2019 г. В рамках Конференции пройдет Молодежная школа-конференция.

Более 770 площадок пожелали присоединиться к Всероссийскому химическому диктанту с международным участием 18 мая
Более 770 площадок подали заявки на участие во II Всероссийском химическом диктанте, который в этом году пройдет с международным участием 18 мая в 13:00. Мероприятие организовано Московским государственным университетом имени М.В. Ломоносова, Химическим факультетом МГУ и корпорацией «Российский учебник» при поддержке Ассоциации учителей и преподавателей химии.

Найдены превращающие свет в электричество камни
Ученые обнаружили возникновение электрического тока в неорганических системах, что напоминает первые этапы усваивания энергии Солнца бактериями и растениями в процессе фотосинтеза. Открытое явление протекает в различных минералах и почвах. В отличие от обычного фотосинтеза, в данном случае участвуют только неорганические соединения, которые не имеют отношения к деятельности живых форм.

Материалы к защитам магистерских квалификационных работ на ФНМ МГУ в 2019 году
Семенова Анна Александровна
21-24 мая 2019 года в лабораторном корпусе Б пройдут защиты магистерских диссертаций выпускниками ФНМ МГУ.

«Наука открывает огромные просторы для творчества»
Яна Хлюстова, Екатерина Мищенко
Об олимпиадах школьников и начале научного пути в интервью Indicator.Ru рассказала Екатерина Жигилева, студентка второго курса химического факультета МГУ им. Ломоносова.

Интервью с Константином Козловым - абсолютным победителем XIII Наноолимпиады
Семенова Анна Александровна
Школьник 11 класса Константин Козлов (г. Москва) стал абсолютным победителем Олимпиады "Нанотехнологии - прорыв в будущее!" 2018/2019 по комплексу предметов "физика, химия, математика, биология". О своих впечатлениях, увлечениях и немного о планах на будущее Константин поделился с нами в интервью.

Технопредпринимательство на марше

Мы традиционно просим вас высказать свои краткие суждения по вопросу технопредпринимательства и проектной деятельности школьников. Для нас очевидно, что под технопредпринимательством и под проектной деятельностью школьников каждый понимает свое, но нам интересно ваше мнение, заодно вы сможете увидеть по мере прохождения опроса, насколько оно совпадает или отличается от мнения остальных. Ждем ваших ответов!

О наноолимпиаде замолвите слово...

Прошла XII Всероссийская олимпиада "Нанотехнологии - прорыв в Будущее!" Мы надеемся, что нам для улучшения организации последующих наноолимпиад поможет электронное анкетирование. Мы ждем Ваших замечаний, пожеланий, предложений. Спасибо заранее!

Опыт обучения в области нанотехнологического технопредпринимательства

В этом опросе мы просим поделиться опытом и Вашим отношением к нанотехнологическому технопредпринимательству и смежным областям. Заранее спасибо за Ваше неравнодушие!



 
Сайт создан в 2006 году совместными усилиями группы сотрудников и выпускников ФНМ МГУ.
Сайт модернизирован для ресурсной поддержки проектной деятельности учащихся в рамках ГК 16.647.12.2059 (МОН РФ)
Частичное или полное копирование материалов сайта возможно. Но прежде чем это делать ознакомьтесь с инструкцией.