Нанотехнологическое сообщество Нанометр, все о нанотехнологиях
на первую страницу Новости Публикации Библиотека Галерея Сообщество Объявления Олимпиада ABC О проекте
 
  регистрация
помощь
 

Изучение бактерий с помощью сканирующего зондового микроскопа. Сравнение различных режимов сканирования. Методики приготовления образцов для исследования на воздухе и в жидкости.

Ключевые слова:  АСМ, бактерии, периодика, СЗМ, сканирование в жидкости

Автор(ы): Большакова Анастасия Владимировна

Опубликовал(а):  Большакова Анастасия Владимировна

05 апреля 2012

Так уж получилось, что одним из первых объектов, который я начала изучать с помощью СЗМ были бактерии. Бактерии имеют весьма «подходящий» размер для этого метода – около 1 микрона в диаметре, и длиной от одного до нескольких микрон. Сканеры с большим полем до 100 микрон были дороги, а потому редки, и бактериальные клетки лучше других клеток подходили для изучения на 14 микронном сканере, которым был оборудован наш СЗМ.

Методика приготовления образца с бактериями для изучения методом СЗМ на воздухе, совсем несложная и не требует специальной подготовки. Петлю из металлической проволоки прокаливают на огне, остужают, и аккуратно подцепляют колонию бактерий, которые предварительно вырастили на твердой питательной среде (бактерии были предоставлены микробиологами). Часть колонии бактерий помещают в стерильную пробирку с дистиллированной водой (или остывшей кипяченой). Концентрацию микроорганизмов определяли на глаз по мутности полученной суспензии (примерно 109 клеток в мл). Затем капаем несколько микролитров препарата на чистую подложку (проще всего использовать свежий скол слюды). Важно в случае с дистиллированной водой быстро накапать суспензию на подложку, чтобы клетки не успели разрушиться. После высыхания образец готов к просмотру.

Мне очень повезло тем, что представилась возможность «увидеть» бактерии с помощью разных приборов, работающих в различных режимах.

Изучение бактерий на воздухе было весьма увлекательным занятием. Я посмотрела огромное количество различных бактерий на микроскопе Nanoscope III a, и даже составила мини атлас СЗМ-изображений, но наблюдения мне на воздухе быстро наскучили, хотелось попробовать выйти на следующий уровень и получить чудесные изображения бактерий в жидкости.

Но, к сожалению, в жидкости особо остро встает проблема закрепления клеток на
подложке. И уже через некоторое весьма непродолжительное время, все клетки были
сметены из области просмотра.

Рис. 1 Изображение бактерий, полученное на СЗМ Nanoscope IIIa в жидкой среде. С течением времени клетки сметаются сканирующей иглой

Изучив литературу, я поняла, что универсальной методики закрепления клеток на поверхности подложки не существует. И я стала пробовать самые различные варианты. После того, как я попробовала модифицировать поверхность слюды полилизином, мне наконец удалось получить вполне достойное АСМ- изображение кишечной палочки (рис. 2).


Рис. 2 Бактерии E.coli в жидкости. Слюда модифицирована полилизином. Изображение получено в контактном режиме на СЗМ Nanoscope IIIa

На рисунке 3 показано изображение бактерии Escherichia coli JM109,
полученное в режиме МАС (Magnetic Alternative Current Mode) на приборе компании Molecular Imaging в жидкости (жидкая питательная среда). Бактерии адсорбированы на поверхность слюды, модифицированной полилизином.



Рис. 3 Бактерии E.coli в жидкости. Слюда модифицирована полилизином. Изображение получено в MAC режиме на СЗМ Molecular Imaging.


Рис. 4 Бактерии E.coli на воздухе



На рисунке 4 показаны те же самые бактерии. В этом случае изображение получено на воздухе на СЗМ Molecular Imaging в резонансном режиме сканирования. Бактериальные жгутики видны более отчетливо, по сравнению с изображением в жидкости.

И еще немного лирики. В журнале «Химия и жизнь. XXI век», 2003 №4 сс. 16-19 была опубликована статья Садовского А.С. «Индиго нестареющий и невыцветающий…», для иллюстрации которой я подготовила изображения бактерий в синей цветовой палитре. В статье сообщалось об использовании бактерий для окрашивания хлопка.

Рис. 5 Страница журнала «Химия и жизнь. XXI век», 2003 №4


Для подготовки публикации использовалась следующая
литература:

  1. Vorobyova E.A., Soina V.S., Mamukelashvili A.G., Bolshakova A., Yaminsky I.V., Mulyukin A.L. Living Cells in Permafrost as Models for Astrobiology Research // Chapter 19 in book "Life in Ancient Ice" (edited by J.D Castello and S.O. Rogers. Published by Princenton university press. 2005. 308 p.) pp. 277-288
  2. Bolshakova A.V., Kiselyova O.I., Yaminsky I.V. Microbial Surfaces Investigated Using Atomic Force Microscopy // Biotechnology progress, v. 20 (N6) 2004, pp.1615-1622
  3. Bolshakova A.V., Vorobyova E.A., and Yaminsky I.V. Indication of living bacterial cells in native soil and permafrost // Phys. Low-Dim. Struct., 3/4, 105-112 (2003).
  4. Bolshakova A.V., Kiselyova O.I., Filonov A.S., Frolova O.Yu., Lyubchenko Yu.L. and Yaminsky I.V. Comparative studies of bacteria with atomic force microscopy operating in different modes // Ultramicroscopy, 86 (1-2), 121-128 (2001).
  5. А.В.Большакова, Е.А.Воробьева, А.С.Филонов, И.В.Яминский Зондовая микроскопия почвенных бактерий Arthrobacter globoformis //Поверхность. Рентгеновские, синхротронные и нейтронные исследования №11, 2000 C. 76-78)



Средний балл: 8.8 (голосов 5)

 


Комментарии

Очень интересная статья. А где посмотреть поподробнее?
Хочется надеяться, что автор покажет полученные им материалы.
Спасибо!
А они светятся?
Нет, они не светятся.
Приглашаю всех присоединиться к нашей страничке на Facebook.
https://www.facebook.com/AdvTechCenter

Для того чтобы оставить комментарий или оценить данную публикацию Вам необходимо войти на сайт под своим логином и паролем. Зарегистрироваться можно здесь

 

Рыба фугу
Рыба фугу

NAUKA 0+ Фестиваль науки в Москве
8-10 октября в Москве проходит Фестиваль науки NAUKA 0+. В этом году фестиваль соберёт учёных со всех шести континентов нашей планеты, лучших исследователей из России, лауреатов государственных премий, молодых учёных, и, конечно, лауреатов Нобелевской премии.

Названы лауреаты Нобелевской премии по химии
Нобелевскую премию по химии за 2021 год присудили Бенджамину Листу и Дэвиду Макмиллану за разработку методов асимметричного органокатализа

Названы лауреаты Нобелевской премии по физике
Нобелевскую премию по физике за 2021 год присудили трем ученым — Сюкуро Манабе, Клаусу Хассельману и Джорджио Паризи.

Материалы к защитам выпускных квалификационных работ бакалавров ФНМ МГУ 2021
Коллектив авторов
Защиты выпускных квалификационных работ (квалификация – бакалавр материаловедения) по направлению 04.03.02 - «химия, физика и механика материалов» на Факультете наук о материалах МГУ имени М.В.Ломоносова состоятся 8, 9, 10 и 11 июня 2021 г. Начало защит в 11.00. Защиты пройдут с использованием дистанционных образовательных технологий.

Академик Е.Н. Каблов: «Для освоения космоса нужны новые материалы»
Янина Хужина
В этом году весь мир отмечает 60-летие первого полета человека в космос. Успех миссии Юрия Гагарина стал возможен благодаря слаженной работе многих людей: физиков, математиков, конструкторов, инженеров-проектировщиков и, конечно, материаловедов. «Научная Россия» обсудила с академиком РАН Евгением Кабловым основные вехи в развитии космического и авиационного материаловедения.

Материалы к защитам магистерских квалификационных работ на ФНМ МГУ в 2021 году
коллектив авторов
25 - 28 мая пройдут защиты магистерских диссертаций выпускниками Факультета наук о материалах МГУ имени М.В.Ломоносова.

Эра технопредпринимательства

В эпоху коронавируса и борьбы с ним в существенной степени меняется парадигма выполнения творческих работ и ведения бизнеса, в той или иной мере касаясь привлечения новых типов дистанционного взаимодействия, использования виртуальной реальности и элементов искусственного интеллекта, продвинутого сетевого маркетинга, использования современных информационных технологий и инновационных подходов. В этих условиях важным является, насколько само общество готово к использованию этих новых технологий и как оно их воспринимает. Данной проблеме и посвящен этот небольшой опрос, мы будет рады, если Вы уделите ему пару минут и ответите на наши вопросы.

Технопредпринимательство в эпоху COVID-19

Небольшой опрос о том, как изменились подходы современного предпринимательства в контексте новых и возникающих форм ведения бизнеса, онлайн образования, дистанционных форм взаимодействия и коворкинга в эпоху пандемии COVID - 19.

Технонано

Технопредпринимательство - идея, которая принесет свои плоды при бережном культивировании и взращивании. И наша наноолимпиада, и Наноград от Школьной Лиги РОСНАНО, и проект Стемфорд, и другие замечательные инициативы - важные шаги на пути реализации этой и других идей, связанных с развитием новых высоких технологий в нашей стране и привлечением молодых талантов в эту вполне стратегическую область. Ниже приведен небольшой опрос, который позволит и нам, и вам понять, а что все же значит этот модный термин, и какова его суть.



 
Сайт создан в 2006 году совместными усилиями группы сотрудников и выпускников ФНМ МГУ.
Сайт модернизирован для ресурсной поддержки проектной деятельности учащихся в рамках ГК 16.647.12.2059 (МОН РФ)
Частичное или полное копирование материалов сайта возможно. Но прежде чем это делать ознакомьтесь с инструкцией.